角膜基质细胞体外长期培养过程中生物学特性的改变

目的 研究兔角膜基质细胞在体外长期培养传代过程中,细胞增殖能力和胞外基质表达水平的改变。方法 取体外培养兔角膜基质细胞,由光镜对各代细胞的形态学变化进行观测。通过对各代细胞生长曲线的绘制,得出其各自的群体倍增时间;MTT法比较各代细胞增殖能力的改变。RT-PCR和Western杂交检测各代细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达水平的改变;爱茜蓝法检测糖胺聚糖(GAG)的含量。结果 体外培养兔角膜基质细胞随着传代的进程,逐渐显现衰老的形态特征。细胞群体倍增时间由第7代起显著延长(P<0.01);MTT比色法的结果亦显示,第7代细胞的增殖能力开始大幅下降(P<0.01)。第9-11代时,Ⅰ、Ⅲ型胶原在mRNA和蛋白水平的表达都有明显减少(P<0.01),降至第1代细胞的30％左右;GAG的含量也降至40％左右。结论 兔角膜基质细胞经历长期体外培养后,细胞增殖能力和胞外基质表达水平显著下降,逐渐丧失原有的功能。但作为构建组织工程化角膜的种子细胞,在它的生物学特性未发生改变之前,经3次传代培养,获取的细胞量达到组织块消化所得细胞的240倍左右,已足以用于构建之用。     

脂质体包裹反义核酸对调控效果和降解时间的影响

目的 观察脂质体Dotap包裹反义脱氧寡核苷酸对酪氨酸酶(TYR)的调控效果和降解时间的影响,寻找适合于临床应用的高效转染、低降解率的载体和应用方法。方法 应用DNA合成仪合成针对TYR的反义脱氧寡核苷酸,32P标记、脂质体包埋,加入黑色素细胞培养体系进行点杂交,行黑素含量、酪氨酸酶mRNA表达量检测以及降解时间的同位素液闪检测。结果 经脂质体包埋的反义脱氧寡核苷酸使细胞黑素含量由(64±2.3)pg/cell下降至(23±1.5)pg/cell,并可使基因表达水平由160%降低至82%;同位素液闪显示经脂质体包埋的反义脱氧寡核苷酸能使其半衰期由8 h延长至12 h。结论 脂质体可以明显增强反义核酸的调控效果,并可延长其作用半衰期。     

组织工程化表皮膜片构建及其在供皮区的应用研究

目的构建组织工程化表皮细胞膜片并应用于供皮区创面治疗。方法利用患者少量自体或同种异体正常皮肤分离、培养、扩增的表皮细胞,接种于壳聚糖明胶膜构建成表皮细胞膜片;将膜片移植于治疗组供皮区创面、适度加压,同时设立对照组:空白材料对照以及传统油纱布对照覆盖创面。于术后5～10d、30d、90d行大体观察、组织学检查、广谱角蛋白、外皮蛋白、层粘连蛋白、免疫组织化学检测以及Ⅰ、Ⅲ型胶原比值测定(偏光显微镜、RTPCR)。结果利用自体及异体表皮细胞和壳聚糖明胶膜能够构建出人表皮细胞膜片,应用于临床供皮区创面治疗15例,经过3个月随访,疗效肯定。移植膜片创面愈合时间(8.1±1.3)d,空白材料对照区为(16.2±3.8)d,空白油纱布对照区为(23.0±5.8)d。移植膜片存活良好,结构较完整、术后30d及90d观察:12例无明显增生,3例有轻度增生(20.0%),而空白油纱布对照区11例遗留增生性瘢痕(74.4%,χ2=8.127,P<0.01)。结论表皮细胞-壳聚糖明胶膜片能促进供皮区创面早期愈合并减少后期瘢痕增生,具有良好治疗效果。     

邻近组织瓣修复下唇部分缺损

唇的外形和色泽既是面部表情的关键所在,又是社交生活中人们关注的焦点之一,其外形的好坏直接影响患者的心理状态乃至生活质量。因此,及时的修复唇缺损,恢复其形态结构及功能十分重要。临床上常遇到创伤、肿物切除及瘢痕切除后形成的下唇部分缺损,自2003年以来,我们采用邻近组织瓣进行下唇部分缺损修复,效果较为满意,报道如下。     

同种异体组织工程化软骨组织的生化分析

目的以胚胎来源的关节软骨细胞,体内构建同种异体组织工程化软骨组织,分析其与正常关节软骨组织糖胺多糖(GAG)和Ⅱ型胶原含量的差异.方法以酶消化法分离胚胎(100 d)山羊关节软骨细胞,与生物材料聚环氧乙烯复合,并植入异体成年山羊腹部皮下.按不同时间段取材, Western-blot、MTT比色法分析测定其GAG和Ⅱ型胶原含量,并与正常关节软骨组织比较.结果新生软骨中GAG的含量比正常关节软骨显著下降(P<0.01),而II型胶原含量与正常关节软骨无显著性差异.结论胚胎来源的同种异体组织工程化软骨与正常关节软骨有着相同的生化成分,且新生软骨中II型胶原的含量与正常关节软骨接近.     

人表皮干细胞在两种培养体系中生长增殖的比较研究

目的比较表皮干细胞(KSC)在两种体外培养体系中的生长增殖状况.方法用差速粘附法分离出的KSC,分别置于无饲养层、无血清培养基以及有饲养层、有血清培养基的培养条件下培养.比较KSC在两种培养体系中的生长增殖、克隆形成率、生长曲线和KSC相关标记物的表达等指标.结果在第二种培养条件下,KSC在生长过程中不存在明显的接触抑制,在较长的体外培养时间内始终保持较高的增殖潜能.两种培养体系间KSC的克隆形成率有显著差异(P＜0.01).流式细胞仪检测两种培养体系间整合素β1阳性率无显著差异,而强阳性率则有显著性差异(P＜0.05).结论体外培养和扩增KSC时,使用人成纤维制备的饲养层和含胎牛血清的培养基,较无饲养层、无血清的培养基,更有利于KSc的扩增及其表型的维持.     

实验性兔后肢淋巴水肿模型构建

目的模拟临床肿瘤根治术后放疗患者的淋巴水肿形成过程,建立并观察一种改良的肢体淋巴水肿动物模型.方法应用传统的淋巴结根治与60钴照射相结合,制作兔后肢淋巴水肿模型.术后观察解剖形态、体积变化,并行淋巴核素造影、组织病理检查.结果动物死亡率为7.8%,在成活动物中模型成功率达100%,产生相应的组织形态变化及淋巴造影表现,其水肿形成规律与临床患者相似;兔后肢淋巴解剖与人较接近,大淋巴管直径约为0.6-0.9 mm.结论该模型成功率高,成本较低,便于观察;由于淋巴管口径较粗,尤其适用于显微淋巴外科的研究.     

软骨细胞老化特征及机制的研究进展

软骨细胞的老化是一个极其复杂的过程，其特征包括：细胞不可逆的生长停滞于G1期；老化相关β-半乳糖苷酶的表达；端粒长度缩短；软骨细胞分化特征的改变。目前认为其机制为基因表达的程序性或减进性改变，包括肿瘤抑制基因p53和pRb等在细胞生长停滞中的作用；端粒结合蛋白和端粒酶对端粒长度的调节；细胞骨架蛋白的重组使软骨细胞形态的变化；基质降解酶类表达增加以及各种细胞因子的变化对软骨细胞代谢的影响。     

腓肠神经内侧头肌支切断术瘦小腿

目的探讨一种以腓肠神经内侧头肌支切断来改善小腿外形的新方法。方法在腘窝处切开,暴露腓肠神经内侧头肌支,并切断,使局部肌肉失神经萎缩,而缩小小腿的容积。结果本组4例,术后小腿周径平均缩小3.6±0.8cm,小腿外形满意。结论本方法为一简单、安全而有效的技术,能达到缩小小腿部的目的。     

组织工程骨血管化的研究进展

近几年,组织工程领域已取得了很多的研究进展,为修复各种原因造成的组织缺损展示了一条新的治疗途径,但由于种种原因仍无法应用于临床。就骨组织工程而言,骨的血管化问题就是导致组织工程化骨组织无法应用于临床的重要原因之一。以往的研究已经证实,种子细胞的存活范围在血供弥散的150～200μm内[1]。如果血管化不能解决,具有较大体积的组织工程化骨组织就难以构建。因此,血管化已是骨组织构建中面临的重要问题。1新生血管形成新生血管形成有两种机制[2]:血管生成(Vasculogenesis)及血管再生(Angiogenesis)。血管生成是血管祖细胞的原位聚…